Dernière mise à jour : 07-Jan-2006

Nous sommes le 08-10-2008 ; il est 06:31 .

SVI 05,
Biologie Moléculaire  :

Chapitre 2 - Partie 2 :

Marquage des acides nucléiques.

Le marquage le plus simple est le marquage radioactif. On peut réaliser celui-ci avec différents isotopes.

- L’isotope le plus classique est le ³²P, d’une demi-vie de 14 jours et E=1,7 MeV (très forte sensibilité).

- Le ³⁵S : sa demi-vie est de 90 jours et E=0,17 Mev. Il est moins sensible mais plus précis que le ³²P.

- Le ³H, sa demi-vie est de 12 ans et E=0,02 Mev.

Exemple avec hybridation sur chromosome.

Pour placer un 35S, on l’insère à la place d’un O.

Pour les marquages froids, on rajoutera des morceaux que l’on peut colorer. Pour les marquages radioactifs, on peut partir de nucléotides triphosphates marqués.

· Translation de coupure ou Nick translation.

- Le phosphate doit être marqué en a car les phosphates b et g seront sortis pendant la synthèse.

- Les deux brins seront marqués.

· Technique de Random Priming (amorçage au hasard).

On part d’ADN double brin en forte concentration.

· Marquage d’ADN double brin grâce à la RNA polymérase.

Dans le cas de deux promoteurs différents sur le même génome, on a les résultats suivants :

Pour la transcription, le promoteur donne le sens de transcription et le brin transcrit.

On peut marquer un acide nucléique en lui ajoutant un phosphore marqué radioactivement sur une extrémité.

- On fait d’abord agir une phosphatase pour enlever le phosphore non marqué.

- On fait en suite agir une kinase avec de l’ATP marqué en g. Le marquage se fera en 5’.